腺病毒包装shRNA/基因过表达 
 
(国家创新基因资助项目)

技术简介:

重组腺病毒(Adenovirus)是一种目前最高效可靠的重组病毒表达系统之一,可用于在哺乳细胞中瞬时及高水平地表达shRNA或目的蛋白质。

其具备以下优点:

1. 宿主范围广:腺病毒除可感染一系列哺乳动物细胞,除可感染几乎所有人的细胞类型外,还可感染包括大鼠、小鼠、兔、猪、羊、猴、鸡等物种。
     2. 因腺病毒的感染不依赖细胞周期,故其既可以感染增殖细胞也可以感染非增殖细胞。
     3. 瞬时高效表达,不整合到基因组中。
     4. 病毒滴度高,可用于动物水平的实验。

 

产品特点:

晶赛公司编码多个shRNA腺病毒系列产品2004年获国家“中小企业创新基金”资助。公司引进美国基因治疗领先实验室的腺病毒制备技术,经过不断的优化和改进,积累了大量的经验,拥有了一支具有一流人才的病毒制备团队,实现了工业化生产要求的重复性和稳定性。晶赛公司腺病毒系统的特点是快速高效,20个工作日即可包装出供体外实验用shRNA表达或基因过表达用腺病毒。我们比较了流行的商业化腺病毒试剂盒和其它一些实验室的腺病毒制备技术,认为这套腺病毒快速包装系统在制备方便性、出毒快捷性、稳定性、重复性和病毒包装可靠性方面都具有一定的优势。

服务内容:

1. 表达shRNA用重组腺病毒。

2. 基因过表达用重组腺病毒。

实验步骤及周期:

1. 将目的基因插入腺病毒重穿梭质粒中。
         实验周期为5个工作日,如客户使用的为晶赛公司的特定载体,则此步可免除。
         如客户要求对载体的特定部件有所要求而需进行特殊改造,则此步实验路线及实验周期另行规定。

2. 将目的基因转移至腺病毒骨架中。
         实验周期为5个工作日。

3. 将确定正确的重组腺病毒质粒包装出毒并扩增至所需滴度。
         进行包装及三轮扩增达到体外实验所需的病毒滴度所需时间为20个工作日,如实验需要进行体内实验或是额外的病毒量,所带来的实验时间另行约定。

4. 对包装出的重组病毒进行质检。
         质检包括对终产品病毒基因进行PCR以确认目的基因的存在,以及对病毒液进行无菌实验,实验周期为5个工作日。

客户须知:

1. 腺病毒的感染依赖于细胞表面的柯萨奇-腺病毒受体(CAR),虽然其可以感染多种宿主及大量的细胞株/系,仍有少量细胞因其表达不带该受体而无法进行有效感染,客户在确定是否采用重组腺病毒之前请先通过阅读文献或是预实验来确定实验的目标基细胞可被腺病毒感染。

2. 本公司目前不提供对致癌基因及毒基因等对人体有危害的基因的包装服务。

3. 如客户所需包装的目的基因由客户提供,则要求客户提供所要构建腺病毒的目的shRNA/基因的序列及其它相关说明信息,所在的载体的图谱及序列。

4. 如客户所需包装的目的基因由客户提供,则客户需要提供足量高纯度的质粒(>5ug,电泳图清晰,达酶切测序要求)及本公司鉴定工作所需的材料。

5. 本公司在收到客户提供的材料后会在第二个工作日起开始鉴定工作,鉴定的时间不包括在腺病毒包装制备的时间内。

6. 客户应对所提供的材料及信息负责,如因客户提供的材料及信息不准确而引起的实验延误或经济损失由客户承担。

服务承诺:

1. 默认情况下本公司提供的病毒量为1ml滴度>109PFU/ml(部分病毒可能因其插入片段本身的毒副影响而对重组腺病毒的滴度有所影响),如需更多量的病毒请具体再商洽。

2. 带有穿梭质粒,重组腺病毒质粒酶切鉴定电泳图,终产物PCR鉴定图谱的实验报告。测序,蛋白表达鉴定等实验内容为可选服务,有需要的客户请另行商定。

3. 为了确保服务质量,合同周期为在实验周期的基础上加10个工作日。但通常情况下,全部服务会在合同约定周期前完成,在这种情况下,我们会提前将产品交付客户使用。

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